الكيمياء الخلوية المناعية
الكيمياء الخلوية المناعية (إنگليزية: Immunocytochemistry، اختصاراً ICC)، هي تقنية معملية شائعة تستخدم لتصور تشريحياً توطين پروتين أو مستضد معين داخل الخلايا باستخدام جسم مضاد أولي محدد للارتباط به. يسمح الجسم المضاد الأولي بتصور الپروتين تحت مجهر فلوري عندما يكون مرتبطًا بجسم مضاد ثانوي يحتوي على فلوروفور. تسمح الكيمياء الخلوية العضوية للباحثين بتقييم ما إذا هناك خلايا في عينة معينة لمستضد التعبير الجيني[1]. في حالة ما إذا كانت هناك إشارة مناعية إيجابية، تسمح الكيمياء الخلوية العضوية أيضاً للباحثين بتحديد أي قسم خلوي فرعي يعبر عن المستضد.
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
الكيمياء الخلوية المناعية مقابل الكيمياء النسيجية المناعية
تختلف الكيمياء الخلوية المناعية عن الكيمياء النسيجية المناعية[2] من حيث أن الأولى تُجرى على عينات من الخلايا السليمة التي تمت إزالة معظمها، إن لم يكن كلها، من مصفوفة خارج الخلية المحيطة. يشمل ذلك الخلايا الفردية التي تم عزلها من كتلة من الأنسجة الصلبة، وخلايا نمت داخل مزرعة، وخلايا ترسبت من معلق، أو خلايا مأخوذة من مسحة. في المقابل، فإن عينات الكيمياء النسيجية المناعية هي أقسام من الأنسجة الحيوية، حيث تُحاط كل خلية ببنية نسيجية وخلايا أخرى توجد عادةً في الأنسجة السليمة.
الكيمياء الخلوية المناعية هي تقنية تستخدم لتقييم وجود پروتين معين أو مستضد في الخلايا (الخلايا المستنبتة، المعلقات الخلوية) باستخدام جسم مضاد محدد، والذي يرتبط به، وبالتالي يسمح بالتصور والفحص تحت المجهر. وهي أداة قيمة لتحديد المحتويات الخلوية من الخلايا الفردية. تشمل العينات التي يمكن تحليلها بقع الدم، والعينات المشفوطة، والمسحات، والخلايا المزروعة، والمعلقات الخلوية.
هناك العديد من الطرق لإعداد عينات الخلايا لتحليل الكيمياء الخلوية المناعية. كل طريقة لها نقاط قوتها وخصائصها الفريدة بحيث يمكن اختيار الطريقة الصحيحة للعينة والنتيجة المرغوبة.
يمكن ربط الخلايا المراد تلطيخها بدعامة قوية للسماح بالتعامل السهل في الإجراءات اللاحقة. يمكن تحقيق ذلك بعدة طرق: يمكن زراعة الخلايا الملتصقة على شرائح مجهرية أو أغطية أو دعامة بلاستيكية مناسبة بصريًا. يمكن طرد الخلايا المعلقة على شرائح زجاجية (السيتوسپين)، أو ربطها بالدعم الصلب باستخدام روابط كيميائية، أو في بعض الحالات يتم معالجتها في معلق.
تعتبر المعلقات الخلوية المركزة الموجودة في وسط منخفض اللزوجة مرشح جيد لتحضيرات المسحة. المعلقات الخلوية المخففة الموجودة في وسط مخفف هي الأنسب لإعداد السيتوسپينات من خلال الطرد المركزي الخلوي. المعلقات الخلوية الموجودة في وسط عالي اللزوجة هي الأنسب للاختبار لتحضير المسحة. الثابت بين هذه الاستعدادات هو أن الخلية بأكملها موجودة على سطح الشريحة. من أجل حدوث أي تفاعل بين الخلايا، يجب أن يجتاز الگلوبولين المناعي أولاً غشاء الخلية السليم في هذه المستحضرات. يمكن أن تكون التفاعلات التي تحدث في النواة أكثر صعوبة، ويمكن للسوائل خارج الخلية أن تخلق عقبات فريدة في أداء كيمياء الخلايا المناعية. في هذه الحالة، تصبح الخلايا المنفذة باستخدام المطهرات (تريتون إكس-100 أو توين-20) أو اختيار المثبتات العضوية (الأسيتون أو الميثانول أو الإيثانول) أمرًا ضروريًا.
تعتبر الأجسام المضادة أداة مهمة لإثبات وجود مستضد وتوطينه تحت الخلوي. يعد تلطيخ الخلايا تقنية متعددة الاستخدامات، وإذا كان المستضد موضعيًا بدرجة عالية، فيمكنه اكتشاف ما لا يقل عن ألف جزيء مستضد في الخلية. في بعض الحالات، يمكن أيضًا استخدام تلطيخ الخلايا لتحديد التركيز التقريبي لمستضد، خاصةً بواسطة محلل الصورة.
الطرق
هناك العديد من الطرق للحصول على الكشف المناعي على الأنسجة، بما في ذلك تلك المرتبطة مباشرة بالأجسام المضادة الأولية أو الأمصال المضادة. تتضمن الطريقة المباشرة استخدام علامة قابلة للاكتشاف (مثل جزيء الفلورسنت وجزيئات الذهب وما إلى ذلك) مباشرة إلى الجسم المضاد[3] مما يسمح له بعدها بالارتباط بالمستضد (على سبيل المثال، الپروتين) في الخلية.
بدلاً من ذلك، هناك العديد من "" الطرق غير المباشرة "". في إحدى هذه الطرق، يرتبط المستضد بجسم مضاد أولي يتم تضخيمه بعد ذلك باستخدام جسم مضاد ثانوي يرتبط بالجسم المضاد الأولي. بعد ذلك، يستخدم كاشف ثلاثي يحتوي على جزء إنزيمي ويرتبط بالجسم المضاد الثانوي. عندما يُطبق الكاشف الرباعي، أو الركيزة، فإن الطرف الأنزيمي من الكاشف الثلاثي يحول الركيزة إلى منتج تفاعل صبغي، والذي ينتج لونًا (العديد من الألوان الممكنة؛ بني، أسود، أحمر، إلخ) في نفس الموقع الذي يتعرف فيه الجسم المضاد الأساسي الأصلي على هذا المستضد المعني.
بدلاً من ذلك، يمكن ربط الجسم المضاد الثانوي تساهميًا بفلوروفور (FITC والرودامين هما الأكثر شيوعًا) الذي يُكتشف تحت مجهر فلوري أو متحد البؤر. سيختلف موقع التألق وفقًا للجزيء المستهدف، والخارجي للپروتينات الغشائية، والداخلي للپروتينات السيتوبلازمية. وبهذه الطريقة، يعد التفلور المناعي أسلوبًا قويًا عند دمجه مع الفحص المجهري البؤري لدراسة موقع الپروتينات والعمليات الديناميكية (الإخراج الخلوي ، الالتقام الخلوي، وما إلى ذلك).
المصادر
- ^ W. Burry, Richard (2010). Immunocytochemistry. Springer, New York, NY. pp. 7–16. ISBN 978-1-4419-1304-3.
- ^ Renshaw, Simon (2017). Immunohistochemistry and Immunocytochemistry: Essential Methods, Second Edition. John Wiley & Sons, Ltd. pp. 35–102.
- ^ Cooper, Mark; Lummas, Sheriden (2016). Immunohistochemistry and Immunocytochemistry: Essential Methods, Second Edition. John Wiley & Sons, Ltd. pp. 21–23.