استشراب طبقة رقيقة
مقالة مفصلة: الاستشراب (التفريغ) اللوني بالطبقة الرقيقة
| Thin-layer chromatography | |
|---|---|
 Separation of black ink on a TLC plate | |
| الاختصار | TLC |
| التصنيف | Chromatography |
| تقنيات أخرى | |
| متعلقات | Agarose gel electrophoresis SDS-PAGE |
الاستشراب اللوني بالطبقة الرقيقة(TLC) أو كروماتوغرافيا الطبقة الرقيقة
الكروماتوگرافيا أو التفريق اللوني هي طريقة لفصل وتنقية المواد الكيميائية المختلطة. وفي كروماتوگرافيا الطبقة الرقيقة نقوم بفصل الخليط لمعرفة ألوانه لكن لا نحصل على مادة اللون بشكل محسوس حيث إن استخدامنا لل TLC أو (Thin Layer Chromatography) بهدف التعرف على مواد لون النبتة بشكل دقيق أكثر .
لوح TLC أو (Thin Layer Chromatography): من طرفها الخلفي موجود معدن الألمنيوم أو الحديد، ويتم تغطية هذه الطبقة أما بـ :
- أكسيد ألمنيوم- هو الوسط الساكن في التجربة (الألومينا) وأكسيد ألمنيوم ورمزه الكيميائي Al2O3، ويوضع على طبقة الألمنيوم مسحوق الالومينا وهو ليس له وظيفة في عملية الكروماتوغرافيا إلا انه يستعمل لكي تلتصق به الطبقة الأخرى.
- السيليكا.
. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .
مقدمة
كرماتوگرافيا الفصل بالطبقة الرقيقة ([TLC]) هي تقنية تستخدم ل فصل مخاليط من المكونات. وذلك عن طريق:
الطور الثابت:
ويكون ذلك على لوح مغلف بطبقة رقيقة من المواد الممتزة على لوح من البلاستيك ، اوالزجاج، أو رقائق الألومنيوم، وهي وعادة هلام السيليكا، أكسيد الألومنيوم، أو السليلوز (نشافة الورق). ومن المعروف هذه الطبقة من الممتزة تعرف بالطور الثابت. ويستخدم الفصل اللوني لفصل خليط من المواد إلى مكوناتها.
الطور المتحرك
سائل معتمدة على الطور الثابت. و الطور المتحرك يتدفق عبر الطور الثابت ويحمل مكونات الخليط معه. المكونات المختلفة تسافر بمعدلات مختلفة. وذلك عبر الطبقة الرقيقة المغلفة بهلام السيليكا أو الألومينا على قطعة من المعدن، الزجاج أو البلاستيك القوي.
فروق TLC عن كروماتوغرافيا العمود
هنالك فروق متعددة ما بين طريقة الفصل "كروماتوغرافيا العمود" وطريقة الفصل "كروماتوغرافيا الطبقة الرقيقة “ ومن بينها :
- في كروماتوغرافيا العمود نقوم بفصل المواد المكونة للخليط فعلياً ونستطيع في النهاية الحصول على كل مادة بشكل منفرد, أما في كروماتوغرافيا الطبقة الرقيقة فلا نستطيع الحصول على المواد منفصلة لأنها تبقى على الورقة، او بعبارة أخرى لا نستطيع استخلاص مواد من خلال كروماتوغرافيا الطبقة الرقيقة لكن في كروماتوغرافيا العمود نستطيع الحصول عليها.
- بالإضافة إلى انه في كروماتوغرافيا الطبقة الرقيقة نحصل على مواد الخليط بشكل أدق من كروماتوغرافيا العمود (حدث ذلك معنا لقصر عمود الكروماتوغرافيا، وكذلك لان عملية فصلنا للمواد كان محصورة بوقت قصير فلو انتظرا يومان أو ثلاثة من الممكن أن نحصل على المواد بشكل أدق)
- نستطيع أن نستعمل ال [TLC] لان عملية الفصل بين المواد فيها أسرع أي بحاجة إلى وقت اقل من كروماتوغرافيا العمود، ففي 5 دقائق تقريبا حصلنا على مركبات الخليط وعرفنا مركباته (في كروماتوغرافيا الـ [TLC])، أما في كروماتوغرافيا العمود فنحتاج إلى وقت أكبر للفصل بين المواد.
- في كروماتوغرافيا الطبقة الرقيقة [TLC] نقطة واحد من الخليط تكفينا لكي نفصل مركباته مما يجعلنا نوفر كمية الخليط المستخدمة في التجربة حيث أننا نستطيع استخدام الكمية المتبقية منه، أما في كروماتغرافيا العمود فنحتاج إلى كمية كبيرة جدا مقارنة بال [TLC].
التقنية العملية
عملية مشابهة لكروماتوغرافياالورق مع ميزةالسرعة،الفصل ألافضل ، والاختيار بين مراحل مختلفة ثابتة. بسبب بساطته وسرعته غالبا ما تستخدم[TLC] لرصد تفاعل كيميائي وللتحليل النوعي لمنتجات التفاعل.
الطريقة
- نضع نقطة او بقعة صغيرة من المحلول تحتوي على العينة على اللوح الرقيق، حوالي 1.5 سم من الحافة السفلى. والمذيب يسمح له بالتبخر التام ، وإلا سوف يتحقق فصل سيئ للغاية أو لا يحدث فصل . إذا تم استخدام مذيب غير متطائر لاذابة العينة، لا بد من تجفيف لوح الفصل في الحاوية الفراغية.
- وهناك كمية من مذيب مناسب تمثل الطور المتحرك تسكب في كأس زجاجي أو أي حاوية شفافة مناسبة (غرفة الفصل) إلى عمق أقل من [1] سنتيمتر. يتم وضع شريط من ورق الترشيح (ويعرف أيضا باسم "الفتيل") في غرفةالفصل، بحيث تلامس القاع المذيب، وتمس جدار غرفة الفصل وتصل تقريبا إلى قمة الحاوية. يتم إغلاق الحاوية بغطاء من الزجاج أو أي غطاء آخر ويترك لبضع دقائق للسماح لأبخرة المذيبات تصعد ورقة الترشيح وتشبع الهواء في الغرفة. (عدم تشبع الغرفة سيؤدي إلى فصل ضعيف والنتائج غير قابلة للتكرار).
- ثم يتم وضع لوح في قاع TLC بحيث البقعة (ق) من العينة لا تلمس سطح الطور المتحرك في الغرفة، ويتم إغلاق الغطاء. والمذيب يتحرك صعودا اعلى اللوح بالخاصية الشعرية، ويجتمع خليط العينة ويحمل عنه لوحة (elutes العينة). عندما يصل المذيب القمة يجب إزالة اللوح لان(استمرار الشطف سوف تعطي نتيجة مضللة) والمجففة.
Step 1
Step 2
Step 3
Step 4
Step 5
Step 6
Step 7
عملية الفصل
- المركبات الكيميائية المختلفة في العينة الخليط تهاجر بمعدلات مختلفة بسبب الاختلافات في الفتها نحو الطور الثابت، وبسبب الاختلافات في قابليتها للذوبان في المذيبات . عن طريق تغيير المذيبات، أو ربما باستخدام مزيج، وفصل مكونات يقاس [عامل التخلف | R الفرعي] القيمة يمكن تعديلها.
- أيضا، يمكن استخدام الفصل يتحقق مع لوحة TLC لتقدير انفصال فلاش اللوني معرض العمودويستند الفصل بين المركبات على المنافسة من المذاب والطور المتحرك عن أماكن ملزمة للمرحلة ثابتة.
- على سبيل المثال،يمكن استخدام هلام السيليكا في المرحلة الطبيعية كمرحلة ثابتة و نظر فيه القطبية. نظرا الي الاختلاف في الاستقطاب، فالمركب ألاكثر قطبية يحتوي على تفاعل أقوى مع السيليكا، وبالتالي أكثر قدرة على تبديد الطور المتحرك من أماكنه . وبالتالي، فإن العنصر الأقل قطبية يتحرك على مستوى اعلى لوحة (مما أدى إلى ارتفاع قيمة RF).
- إذا تغير الطور المتحرك إلى المذيبات القطبية أكثر أو خليط من المذيبات، فمن أكثر قدرة على تبديد المواد المذابة من الأماكن والمركبات ملزمة السيليكا كل شيء على لوحة TLC سوف تتحرك على مستوى اعلى لوحة.
- السائد القول ان "المذيبات القوية" (elutants) مركبات اكثر دفعا خلال لوح التحليل ، في حين أن "المذيبات الضعيفة" elutants تتحرك بصعوبة بالغة . ترتيب القوة / الضعف يعتمد على طلاء (الطور الثابت) من لوحة TLC . لوحات هلام السيليكا TLC المغلفة، ويزيد من قوة elutant وفقا للترتيب التالي:
- Perfluoroalkane (أضعف)، الهكسين، بنتان، رابع كلوريد الكربون، البنزين / التولوين، ثنائي كلورو ميثان، ايثر، Ethylacetate، الأسيتونيتريل، الأسيتون، 2-بروبانول / N-بيوتانول ، المياه، الميثانول، الترايثلامين، حمض الخليك، حمض الفورميك (أقوى). ل C18 لوحات مطلية النظام هو عكس ذلك.
- عمليا هذا يعني أنه إذا كنت تستخدم خليط من اسيتات والهكسان والطور المتحرك، مضيفا النتائج خلات الإيثيل أكثر في قيم أعلى الترددات اللاسلكية لجميع المركبات على لوحة TLC. تغيير قطبية الطور المتحرك وعادة لا يؤدي إلى عكس ذلك من تشغيل للمركبات على لوحة TLC . إن سلسلة eluotropic يمكن أن تستخدم كدليل في اختيار الطور المتحرك. إذا هو المطلوب من نظام تشغيل عكس من المركبات، يجب استخدام مرحلة عديم الأقطاب ثابتة، مثل C18-functionalized السيليكا.
- مثالا على ذلك اللوني من مستخرج من أوراق خضراء (على سبيل المثال السبانخ) في 7 مراحل التنمية. كاروتين أزل بسرعة ومرئيا فقط حتى الخطوة 2. الكلوروفيل A و B في منتصف الطريق في الخطوة الأخيرة وتين في تلطيخ أول مركب الصفراء
